Jessalyn Gilsig wuchs in Montreal auf und begeisterte sich schon früh für die Schauspielerei. Doch erst im Alter von 12 Jahren erlaubten ihr ihre Eltern zu einem Vorsprechen zu gehen. Bei diesem Vorsprechen bekam sie promt eine Synchronisationsrolle in einem kurzen Animationsfilm angeboten.

Sie besuchte von 1989 bis 1993 die McGill University, Montreal, Quebec und verließ diese mit einem Abschluss in Englisch. Sie interessierte sich sehr für das Theater und besuchte anschließend das American Repertory Theatre Institut für "Fortgeschrittenes Theater Training" an der Harvard University. Zu ihren Projekten dort zählten u.a. "The Cherry Orchard" und "Henry V".

1999 sollte sie Paula Marshall in der Serie "Snoops" ersetzen, jedoch wurde die Serie abgesetzt, noch bevor für Jessalyn auch nur einmal die Klappe gefallen war. David E. Kelly gab ihr dann anschließend eine Rolle in seiner neuen Show "Boston Public". Diese verließ sie 2 Jahre später und war ab 2003 als Gina Russo in der Erfolgsserie "Nip/Tuck" zu sehen.